Медиатека

Что такое бактериальные эндотоксины?

Эндотоксины – это липополисахариды (LPS), которые присутствуют в клеточной стенке грамотрицательных бактерий.

Какими свойствами обладают эндотоксины?

• Эндотоксины присутствуют везде в окружающей среде (везде, где есть грамотрицательные бактерии – вода, воздух).
• Эндотоксины очень стабильны – их нельзя инактивировать путем стандартного автоклавирования.
  Для их полной инактивации требуется сухая стерилизация в течении не менее 30 минут при температуре 250 °C.
• Если эндотоксины попадают в кровоток даже в пикограмовых (пг, 10^-12 г) количествах, то это вызывает различные биологические реакции. Именно поэтому уровень эндотоксинов контролируется при выпуске лекарственных средств и изделий медицинского назначения, которые в свою очередь вступают в контакт с кровью.

Какой метод детекции эндотоксинов является реально работающим и надежным?

Самый чувствительный метод детекции эндотоксинов основан на реакции лизата клеток крови (амебоцитов) мечехвостов рода Limulus с эндотоксинами (LAL-тест – Лизат амебоцитов Limulus). Этот метод прописан в национальных Фармокопеях (собрание нормативных документов, которые регламентируют качество лекарственных средств).

В чем заключается принцип работы LAL-теста?

Лизат клеток крови и мечехвостов содержит определенные факторы (протеазы), которые активируются цепной реакцией при попадании эндотоксина. Путем последовательной активации, на последней стадии идет активирование фермента, который может переводить коагулоген в коагулин. При этом процессе идет либо увеличение мутности раствора, либо формирование геля. Также можно применять субстрат, который будет расщепляться данным ферментом. Таким образом будет образовываться пептид, а раствор будет окрашиваться в желтый цвет.

Какие есть способы детекции эндотоксинов?

Существует три способа детекции эндотоксинов с использованием одной и той же реакции:

• Гель-тромб тест (образование геля)
• Турбидиметрический тест (помутнение раствора)
• Хромогенный тест (окрашивание раствора)