Медиатека

LAL-тесты – что это?

Отвечаем на главные вопросы о реактивах и оборудовании для определения уровня эндотоксинов.

Что такое бактериальные эндотоксины?

Эндотоксины – это липополисахариды (LPS), которые присутствуют в клеточной стенке грамотрицательных бактерий.

Какими свойствами обладают эндотоксины?

  • Эндотоксины присутствуют везде в окружающей среде (везде, где есть грамотрицательные бактерии – вода, воздух).
  • Эндотоксины очень стабильны – их нельзя инактивировать путем стандартного автоклавирования.
    Для их полной инактивации требуется сухая стерилизация в течении не менее 30 минут при температуре 250 °C.
  • Если эндотоксины попадают в кровоток даже в пикограмовых (пг, 10-12 г) количествах, то это вызывает различные биологические реакции. Именно поэтому уровень эндотоксинов контролируется при выпуске лекарственных средств и изделий медицинского назначения, которые в свою очередь вступают в контакт с кровью.

Какой метод детекции эндотоксинов является реально работающим и надежным?

Самый чувствительный метод детекции эндотоксинов основан на реакции лизата клеток крови (амебоцитов) мечехвостов рода Limulus с эндотоксинами (LAL-тест – Лизат амебоцитов Limulus). Этот метод прописан в национальных Фармокопеях (собрание нормативных документов, которые регламентируют качество лекарственных средств).

В чем заключается принцип работы LAL-теста?

Лизат клеток крови и мечехвостов содержит определенные факторы (протеазы), которые активируются цепной реакцией при попадании эндотоксина. Путем последовательной активации, на последней стадии идет активирование фермента, который может переводить коагулоген в коагулин. При этом процессе идет либо увеличение мутности раствора, либо формирование геля. Также можно применять субстрат, который будет расщепляться данным ферментом. Таким образом будет образовываться пептид, а раствор будет окрашиваться в желтый цвет.


Какие есть способы детекции эндотоксинов?

Существует три способа детекции эндотоксинов с использованием одной и той же реакции:

  • Гель-тромб тест (образование геля)
  • Турбидиметрический тест (помутнение раствора)
  • Хромогенный тест (окрашивание раствора)

Какие наборы присутствуют в линейке LAL-тестов от компании Wako?

В линейке LAL-тестов компании Wako присутствуют наборы, которые позволяют детектировать эндотоксины всеми тремя методами, о которых мы рассказали ранее. Наборы могут быть двух типов: для одиночных тестов (где LAL-реагент подготовлен заранее в одиночных пробирках), либо для множественных тестов (LAL-реагент поставляется в одном флаконе).
В таком случае пользователь сам разводит его в воде, которая не содержит эндотоксинов, и самостоятельно разносит в реакционные пробирки или планшеты.

Какую аппаратуру для проведения ЛАЛ-теста предлагает компания Wako?

Набор токсинометра, который выпускается компанией FUJIFILM (компания Wako является дочерней компанией FUJIFILM), поставляется в комплекте с компьютером и программным обеспечением.
Токсинометр позволяет одновременно проводить 16 тестов с компьютером, при этом к одному компьютеру может быть подключено вплоть до 8-ми таких приборов.
Для своих тестов компания FUJIFILM также предлагает микропланшетный ридер с компьютером с комплексным программным обеспечением.