Taq ДНК-полимераза нативная с бычьим сывороточным альбумином (BSA)

Артикул: EP0072

Производитель: Thermo Fisher Scientific

Цена в валюте / в рублях

Фасовка:

$185.98

12 641.60 р.

Описание

Концентрация фермента – 5 е.а./мкл.

В упаковку также входят:

  • 10x буфер Taq с KCl;
  • 10х буфер Taq с (NH4)2SO4;
  • 25 мМ раствор MgCl2;
  • бычий сывороточный альбумин (концентрация 20 мг/мл).

Taq ДНК-полимераза – термостабильная полимераза из термофильной бактерии Thermus aquqticus. При инкубировании фермента при 95 °С в течение 40 мин его активность снижается только в 2 раза. Taq ДНК-полимераза катализирует синтез ДНК в направлении с 5'- на 3'-конец. Фермент не обладает детектируемой корректирующей 3'-5'-экзонуклеазной активностью, но имеет дезоксинуклеотидилтрансферазную активность. Это приводит к присоединению дополнительного остатка dA на 3'-конец продукта ПЦР.

Нативная Taq ДНК-полимераза выделена из клеток клеток Thermus aquqticus YT1. Молекулярная масса мономера фермента 94 кДа.

Нативная Taq ДНК-полимераза поставляется в комплекте с бычьим сывороточным альбумином (BSA) в качестве стабилизирующего агента. Такая версия фермента является лучшим выбором при амплификации плохо очищенных препаратов ДНК. Нативная Taq ДНК-полимераза подходит для синтеза методом ПЦР фрагментов длиной до 5000 звеньев с геномной и 10000 звеньев с вирусной ДНК. В качестве субстратов этого фермента могут выступать трифосфаты практически всех модифицированных нуклеозидов (например, содержащие биотин, дигоксигенин, флуоресцентные метки). Точность ПЦР с помощью Taq полимеразы определяется как среднее число правильных нуклеотидов, встроенных в растущую цепь ДНК до появления ошибки, и составляет 4,5 х 104.

Области применения нативной Taq ДНК-полимеразы:

  • амплификация методом ПЦР;
  • получение продуктов ПЦР для ТА-клонирования;
  • введение метки в ДНК;
  • определение нуклеотидной последовательности ДНК.

За единицу активности нативной Taq ДНК-полимеразы принимают количество фермента, необходимое для включения 10 нмоль дезоксирибонуклеотидов в ДНК-фрагмент, иммобилизованный на носителе DE-81, за 30 мин при 70 °С. Исследование ферментативной активности проводят в 67 мМ Трис-HCl буфере (рН 8,8 при 25 °С), содержащем 50 мМ NaCl, 6,7 мМ MgCl2, 1 мМ 2-меркаптоэтанол, 0,1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина, 0,75 мМ активированную ДНК из молоки лосося, 0,2 мМ раствор каждого из dNTP и 0,4 МВк/мл [3H]dTTP.

Буфер для хранения нативной Taq ДНК-полимеразы:

20 мМ Трис-HCl (рН 8,0), 100 мМ КCl, 1 мМ ДТТ, 0,1 мМ ЭДТА, 0,5% (v/v) нонидета Р40 , 0,5% (v/v) твина 20, 50% глицерина.

Условия хранения: -20 °С.

10x буфер Taq с KCl: 100 мМ Трис-HCl (рН 8,8 при 25 °С), 500 мМ КCl, 0,8% (v/v) нонидета Р40.
10x буфер Taq с (NH4)2SO4: 750 мМ Трис-HCl (рН 8,8 при 25 °С), 200 мМ (NH4)2SO4, 0,1% (v/v) твина 20. Этот буфер позволяет проводить ПЦР в широком диапазоне концентраций ионов магния и избежать неспецифической гибридизации праймеров к ДНК.
Для проведения ПЦР на микрочипах рекомендуется использовать 10х буфер Taq без детергентов (В55): 100 мМ Трис-HCl (рН 8,8 при 25 °С), 500 мМ КCl.

Внимание! Ингибиторами нативной Taq ДНК-полимеразы являются ионные детергенты - дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия - в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01% соответственно. Фермент удаляется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Рекомендуемый протокол проведения ПЦР:

  • Все растворы после размораживания тщательно перемешать и осадить капли быстрым центрифугированием;
  • Поместить тонкостенные пробирки для ПЦР в баню со льдом;
    • Приготовить стоковую смесь, состоящую из воды, буфера, трифосфатов нуклеотидов, праймеров и полимеразы (объем стоковой смеси рассчитывается исходя из числа реакций плюс ещё одна реакция для уменьшения ошибки эксперимента, связанной с ошибкой пипетки);
    • Отобрать аликвоты и добавить ДНК-матрицу;
    • Объем смеси для одной реакции – 50 мкл;
    • Состав реакционной смеси:
      • 10х буфер Taq – 5 мкл;
      • смесь dNTP, содержащая 2 мМ раствор каждого из нуклеозидтрифосфатов (R0241) – 5 мкл;
      • прямой праймер – 0,1-1 мкМ;
      • обратный праймер – 0,1-1 мкМ;
      • 25 мМ MgCl2 (R0971) - 1-4 мМ;
      • ДНК-матрица – 10 пкг-1 мкг;
      • нативная Taq ДНК-полимераза - 1,25 е.а.;
      • вода без нуклеаз (R0581) – до 50 мкл.

Объём реакционной смеси может быть изменен, но концентрации компонентов должны оставаться теми же.

  • Перемешать образцы и осадить капли.

Если термоциклер не снабжён нагреваемой крышкой, то в каждый образец нужно добавить по 25 мкл минерального масла. Условия проведения ПЦР представлены в табл. 1.

Таблица 2. Рекомендуемые условия ПЦР.

Этап Температура, °С Время, мин Количество циклов
Первоначальная денатурация 95 1-3 1
Денатурация 95 0,5 25-40
Гибридизация праймеров T плавления -5 0,5
Элонгация 72 1 мин на 1000 нуклеотидных звеньев
Финальная элонгация 72 5-15 1

 

Модификации

Товар с ценой по запросу можно также разместить в корзину. Наш менеджер свяжется с Вами и уточнит цену. Заказ будет оформлен только в том случае, если Вас устроят все условия.

Описание

Артикул

Цена

Кол-во

Сумма

Taq ДНК-полимераза нативная с бычьим сывороточным альбумином (BSA)

EP0072

$185.98 12 641.60 р. 12 641.60 р. 185.98 12641.599942 12641.599942 RUB

$0

0 р.

Итого: $0

0 р. Заказать

Здесь вы можете увидеть расходные материалы для данного оборудования

Здесь вы можете увидеть комплектующие для данного оборудования