Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start

Снято с производства с апреля 2018 г. Заменено на полимеразу DreamTaq Hot Start DNA.

Артикул: EP0609

Производитель: Thermo Fisher Scientific

Фасовка:

Запросить цену

Описание

Снято с производства с апреля 2018 г. Заменено на полимеразу DreamTaq Hot Start DNA.


Концентрация фермента – 5 е.а./мкл.

В упаковку также входят:

  • 10X буфер для проведения ПЦР с «горячим стартом» (Hot Start PCR buffer);
  • 25 мМ раствор MgCl2.

Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start создана специально для проведения ПЦР с «горячим стартом», что позволяет повысить специфичность и чувствительность реакции, а также увеличить эффективность амплификации ДНК. Фермент представляет собой рекомбинантную химически модифицированную форму Taq ДНК-полимеразы, аминокислотные остатки которой содержат термолабильные защитные группы. Эта модификация делает Taq ДНК-полимеразу Maxima™ Hot Start неактивной. Фермент становится функционально активным после прогревания в течение 4 мин при 95 ºС и проявляет свойства Taq ДНК-полимеразы. Taq ДНК-полимераза Maxima™Hot Start катализирует синтез ДНК в направлении с 5'- на 3'-конец. Фермент не обладает детектируемой корректирующей 3'-5'-экзонуклеазной активностью, но проявляет невысокую 5'-3'-экзонуклеазную активность. Кроме того, Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start имеет дезоксинуклеотидилтрансферазную активность. Это приводит к присоединению дополнительного остатка dA на 3'-конец продукта ПЦР. 5'-3'-Экзонуклеазная и дезоксинуклеотидилтрансферазная функции не детектируются до активации фермента. Молекулярная масса мономера фермента 94 кДа. Свойства Taq ДНК-полимеразы Maxima™ Hot Start в сравнении с другими разновидностями Taq ДНК-полимеразы приведены в табл. 1.

Активация Taq ДНК-полимеразы Maxima™ Hot Start при высокой температуре гарантирует функционирование фермента, когда праймеры или их димеры уже не могут гибридизоваться на «неправильной» матрице, что обеспечивает высокую специфичность амплификации ДНК. Поскольку фермент неактивен при комнатной температуре, он может быть добавлен в реакционную смесь непосредственно при ее подготовке.

Таблица 1. Сравнение свойств Taq ДНК-полимераз.

Фермент Максимальный размер
продукта
Выход Точность действия* Чувстви-
тельность
«Горячий старт» Концы ПЦР-продукта

Встраивание

dUTP

Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start 3000 нуклеотидных звеньев с геномной и 5000 звеньев с вирусной ДНК +++ 1 +++ да 3'-dA да
Taq ДНК-полимераза DreamTaq™ 6000 нуклеотидных звеньев с геномной и 20000 звеньев с вирусной ДНК +++++ 1 ++ нет 3'-dA нет
Taq ДНК-полимераза 5000 нуклеотидных звеньев с геномной и 10000 звеньев с вирусной ДНК ++ 1 + нет 3'-dA да
Taq ДНК-полимераза TrueStart™ Hot Start 3000 нуклеотидных звеньев с геномной и 5000 звеньев с вирусной ДНК +++ 1 +++ да 3'-dA да
* По сравнению с Taq ДНК-полимеразой

Области применения Taq ДНК-полимеразы Maxima™ Hot Start:

  • ПЦР с «горячим стартом»;
  • Амплификация с высоким выходом фрагментов ДНК длиной до 3000 пар нуклеотидов с геномной ДНК и до 5000 пар нуклеотидов с вирусной ДНК;
  • ПЦР в реальном времени;
  • Высокоспецифичная амплификация сложных геномных матриц и кДНК;
  • Амплификация низкокопийных ДНК-мишеней;
  • Количественная ПЦР;
  • Мультиплексная ПЦР;
  • Получение продуктов ПЦР для ТА-клонирования.

За единицу активности Taq ДНК-полимеразы Maxima™ Hot Start принимают количество фермента, необходимое для включения 10 нмоль дезоксирибонуклеотидов в ДНК-фрагмент, иммобилизованный на носителе DE-81, за 30 мин при 74 ºС. Исследование ферментативной активности проводят в 25 мМ (N-[Трис-(гидроксиметил)-метил]-3-аминопропансульфонатном (TAPS) буфере (рН 9,3 при 25 ºС), содержащем 50 мМ KCl, 2 мМ MgCl2, 0,75 мМ активированную ДНК из молоки лосося, 0,2 мМ раствор каждого из dATP, dGTP, dTTP, 0,1 мМ dCTP и 0,4 МВк/мл [3H]dCTP.

Буфер для хранения Taq ДНК-полимеразы Maxima™ Hot Start:

20 мМ Трис-HCl (рН 9,0), 100 мМ КCl, 1 мМ ДТТ, 0,1 мМ ЭДТА, 0,5% (v/v) нонидета Р40 , 0,5% (v/v) твина 20, 50% глицерина.

Условия хранения: -20 ºС.

10X буфер для проведения ПЦР с «горячим стартом» (Hot Start PCR buffer): 200 мМ Трис-HCl (рН 8,3 при 25 ºС), 200 мМ КCl, 50 мМ (NH4)2SO4.

Внимание! Ингибиторами Taq ДНК-полимеразы Maxima™ Hot Start являются ионные детергенты - дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия – в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01% соответственно. Фермент не ингибируется при нагревании, но удаляется экстракцией смесью фенол/хлороформ или методом гель-фильтрации.

Рекомендуемый протокол проведения ПЦР:

  • Все растворы после размораживания тщательно перемешать и осадить капли быстрым центрифугированием. Все компоненты реакционной смеси должны храниться в бане со льдом. Приготовление смеси может проводиться при комнатной температуре;
    • Приготовить стоковую смесь, состоящую из воды, буфера, трифосфатов нуклеотидов, праймеров и полимеразы. (Объем стоковой смеси рассчитывается исходя из числа реакций плюс ещё одна реакция для уменьшения ошибки эксперимента, связанной с ошибкой пипетки);
    • Отобрать аликвоты и добавить ДНК-матрицу;
    • Объем смеси для одной реакции – 50 мкл;
    • Состав реакционной смеси:
      • 10X буфер для проведения ПЦР с «горячим стартом» (Hot Start PCR buffer) – 5 мкл;
      • смесь dNTP, содержащая 2 мМ раствор каждого из нуклеозидтрифосфатов (R0241) – 5 мкл;
      • прямой праймер – 0,1-1 мкМ;
      • обратный праймер – 0,1-1 мкМ;
      • 25 мМ MgCl2 (R0971) – 1-4 мМ;
      • ДНК-матрица – 1 пкг-1 мкг;
      • Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start – 1,25-2 е.а.;
      • вода без нуклеаз (R0581) – до 50 мкл.

Объём реакционной смеси может быть изменен, но концентрации компонентов должны оставаться теми же.

  • Перемешать образцы и осадить капли.

Если термоциклер не снабжён нагреваемой крышкой, то в каждый образец нужно добавить по 25 мкл минерального масла. Условия проведения ПЦР представлены в табл. 2.

Таблица 2. Рекомендуемые условия ПЦР.

Этап Температура, °С Время, мин Количество циклов
Первоначальная денатурация 95 4 1
Денатурация 95 0,5 25-40
Гибридизация праймеров T плавления -5 0,5
Элонгация 72 1 мин на 1000 нуклеотидных звеньев
Финальная элонгация 72 5-15 1

 

Вы можете воспользоваться пробником на 20 е.а.

Модификации

Товар с ценой по запросу можно также разместить в корзину. Наш менеджер свяжется с Вами и уточнит цену. Заказ будет оформлен только в том случае, если Вас устроят все условия.

Описание

Артикул

Цена

Кол-во

Сумма

Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start

EP0603

 

Запросить цену

Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start

EP0602

 

Запросить цену

Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start

EP0601

 

Запросить цену

Taq ДНК-полимераза Maxima™ Hot Start

EP0609

 

Запросить цену

Здесь вы можете увидеть расходные материалы для данного оборудования

Здесь вы можете увидеть комплектующие для данного оборудования