18

авг

Редактирование генома с CRISPR-Cas9

В последние годы одной из самых обсуждаемых тем в мире молекулярной биологии стала технология CRISPR/Cas9, позволяющая добавлять, удалять и вносить изменения в геном высших организмов. CRISPR-Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated genes (proteins) может стать мощным инструментом борьбы со многими социально значимыми заболеваниями, среди которых рак, наследственные болезни и ВИЧ. Технология появилась благодаря исследованию адаптивной иммунной системы бактерий и основана на способности бактерии узнавать вирусную ДНК и ликвидировать ее. При этом в системе задействованы только два компонента: фермент Cas9 и короткие некодирующие последовательности CRISPR РНК (crРНК/tracrРНК).

Лекция по CRISPR-Cas 9 от одного из создателей технологии Дженнифер Дудны на портале TED:

Система GeneArt CRISPR-Cas9 от Invitrogen предоставляет полное решение для геномного редактирования, начиная с дизайна и синтеза гидовой РНК до детектирования и анализа эффективности редактирования.

В настоящее время мы предлагаем полный набор реагентов в нескольких форматах для большего удобства и наиболее эффективного использования возможностей системы. Данные решения сочетаются с клеточными культурами, способами доставки и методами анализа под ваши приложения и типы клеток. Вы сможете выбрать оптимальный и надежный метод под ваши задачи.

GeneArt-Cas9 для редактирования генома

GeneArt-Cas9.jpg

Шаг 1Дизайн гид-РНК (выбор таргетной последовательности и олигонуклеотида для синтеза гид-РНК онлайн).

Шаг 2. В зависимости от поставленных задач вы можете выбрать необходимый формат проведения реакции трансфекции:

Синтез гид-РНК (CRISPR белок или CRISPR мРНК)
или
CRISPR плазмида

ОПИСАНИЕ:

Синтез гид-РНК 
A29377 GeneArt™ Precision gRNA Synthesis Kit на 25 реакций. Время синтеза гидовой РНК менее 4 часов.

CRISPR белок. Комплекс белок-гидовая РНК.

Protein.jpg
  • Обеспечивает эффективность, минимум неспецифического редактирования;
  • Действует сразу после введения в клетку.

CRISPR мРНК. мРНК CAS9 и гид-РНК.

  • Универсальность, простота;
  • Позволяет проводить мультиплексное геномное редактирование, с несколькими гид-РНК для нескольких таргетных последовательностей гена в единой реакции.

CRISPR плазмида. Система экспресии «все-в-одном» CAS9 и гид-РНК.

  • Простое и эффективное клонирование двухцепочечного олигонуклеотида ДНК, кодирующего таргет-специфичную CRISPR-РНК и нуклеазу CAS9).

Линейка реагентов Lipofectamine и электропораторов Neon от компании Thermo Fisher Scientific полностью обеспечивает потребности для поставки CRISPR-Cas9 системы при редактировании генома. Все протоколы оптимизированы для достижения высокой эффективности расщепления и легкости доставки.

Методы/Реактивы трансфекции  
Методы доставки системы CRISPR
CRISPR ДНК CRISPR мРНК CRISPR белок Лентивирус
Lipofectamine CRISPRMAX
Скачать протокол
Lipofectamine 3000
Скачать протокол
Электропоратор NEON
Скачать протокол
Lipofectamine MessangerMAX
Скачать протокол
Lipofectamine Stem
(рекомендуется для стволовых клеток)
Протокол


Продукция Фасовка Артикул
CRISPR-Cas9 Белок
GeneArt Platinum Cas9 Nuclease (1 мкг/мкл) 10 мкг B25642
GeneArt Platinum Cas9 Nuclease (1 мкг/мкл) 25 мкг B25640
GeneArt Platinum Cas9 Nuclease (3 мкг/мкл) 75 мкг B25641
CRISPR-Cas9 мРНК
GeneArt Precision gRNA Synthesis Kit 25 реакций A29377
Custom-synthesized gRNA Inquire at GEMServices@thermofisher.com
CRISPR-Cas9 Плазмиды
GeneArt® CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit 10 реакций A21174
GeneArt® CRISPR Nuclease Vector with CD4 Enrichment Kit 10 реакций A21175
Вектор GeneArt® CRISPR с набором для обогащения CD4 10 реакций A21177
Набор для геномного редактирования GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector с репортером OFP 10 реакций A21178
CRISPR гид-РНК
GeneArt™ CRISPR Nuclease mRNA 15 мкг A29378
Invitrogen™ TrueGuide™ Custom gRNA 1 флакон A32044
Invitrogen™ LentiArray™ gRNA 1 флакон A32042
Реагенты для детектирования и анализа
GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit 20 реакций A24372
Реагенты для трансфекции
Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection 75 реакций CMAX00008
Оборудование
Neon Transfection System 1 шт. MPK5000

Информационные материалы:

Modul-CRISPR.jpg
Скачать модуль по CRISPR: Геномное редактирование с помощью CRISPR-CAS9


Скачать статью Xiquan Liang, Jason Potter, Shantanu Kumar, Namritha Ravinder, Jonathan D. Chesnut. Enhanced CRISPR/Cas9-mediated precise genome editing by improved design and delivery of gRNA, Cas9 nuclease, and donor DNA. Journal of Biotechnology, 2017, 136–146

Скачать статью Swati Kadam. CRISPR-Cas9 Genome Editing Guide – Finessing the technique and breaking new ground. URL: https://www.thermofisher.com/blog/behindthebench/crispr-cas9-genome-editing-guide-finessing-the-technique-and-breaking-new-ground/

Видео-материал:

Подробнее у менеджеров Компании Хеликон по телефону +7 499 705-50-50 или по электронной почте mail@helicon.ru.


Возврат к списку

Подпишитесь и получайте дополнительные скидки