31

май

Helios и Hyperion – новое слово в многопараметрическом исследовании клеток и тканей

Масс-цитометрия – новый метод, только недавно появившийся на рынке. Однако, количество получаемых данных и простота постановки эксперимента делают его многообещающим и перспективным инструментом для получения качественных научных данных.

Золотым стандартом фенотипирования клеток являются проточная цитометрия и флуоресцентная микроскопия. Однако, оба метода основаны на использовании флуоресцентных красителей, что существенно ограничивает возможности одновременного многопараметрического анализа из-за перекрывания спектров различных красителей, фоновой флуоресценции и неравномерности окрашивания:

Перекрывание спектров | Разная интенсивность сигнала | Фоновая флуоресценция

Компания Fluidigm – один из мировых лидеров по производству высокотехнологического оборудования на основе микрофлюидных технологий – разработала системы Helios и Hyperion для многопараметрического анализа фенотипа клеток в суспензии и тканевом микроокружении, в которых используется принципиально другая технология – масс-цитометрия, которая позволяет избежать проблем флуоресцентного анализа.

Особенностью масс-цитометрии является то, что детектируется молекулярная масса метки, а не сигнал флуоресценции. Клетки метятся антителами Maxpar®, конъюгированными с изотопами редкоземельных металлов (лантаноидов), отличающиеся между собой молекулярной массой. Прибор способен различать массы с разницей в 1 Да. Соответственно, каждой метке соответствует четкий пик, который не перекрывается с соседними. Кроме того, благодаря равномерности мечения, возможен количественный анализ сигнала.

Четко разделенные пики | Равномерность мечения | Отсутствие фона

Приборы имеют 135 каналов детекции, каждый из которых позволяет детектировать одну изотопную метку. На данный момент используются 37 изотопов лантаноидов, однако в будущем возможно значительное увеличение количества одновременно исследуемых параметров. При этом изменение конфигурации приборов не потребуется.

Технология масс-цитометрии хороша в тех областях, где требуется анализ клеток по большому количеству маркеров одновременно. Например, иммунологам этот метод позволяет в рамках одного эксперимента определить все основные популяции клеток, участвующих в иммунном ответе:

Компания Fluidigm разработала готовые панели антител, в которых оптимальным образом подобраны меченные антитела к основным белковым маркерам клеток иммунной системы (Human Immune Monitoring Panel, 29 маркеров), к онкомаркерам Т-клеток (Complete Human T Cell Immuno-Oncology Panel, 34 маркера) и другие. Возможен заказ пользовательских панелей, а также покупка изотопных меток и самостоятельное мечение антител.

Для метода масс-цитометрии доступен мультиплексный анализ нескольких образов в одной пробирке благодаря баркодированию образцов. Баркоды Cell-ID™ позволяют исследовать до 20 образцов в рамках одной реакции.

Данные, получаемые в результате масс-цитометрии с помощью прибора Helios, представлены как в количественном виде, так и в виде стандартных графиков – гистограмм или двумерных dotplot-графиков (точечных диаграмм). Данные сохраняются в формате .fcs, что позволяет обрабатывать их с помощью стандартного программного обеспечения для проточной цитометрии.

Пример данных, полученных с помощью системы Helios:

Analysis of cell surface and intranuclear markers on non-stimulated human PBMC using mass cytometry
Gaëlle Dzangué-Tchoupou, Aurélien Corneau, Catherine Blanc, Olivier Benveniste, Yves Allenbach
Published:March 22, 2018 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0194593

C устройством масс-цитометра Helios (серия CyTOF) и основами работы с программным обеспечением можно ознакомиться в видео>>

Для анализа клеток непосредственно в тканевом микроокружении подойдёт система Hyperion.

Hyperion представляет собой двухмодульную систему – масс-цитометр Helios и модуль для визуализации тканей. Срез ткани или фиксированные клетки помещают на слайд и метят антителами, конъюгированными с изотопами лантаноидов. Далее слайд загружают в прибор. В камере для анализа лазер облучает область площадью 1 мкм2, направляя изотопы металлов на анализ методом масс-цитометрии.

Пример изображения, полученного с одного участка ткани с помощью системы Hyperion:

Метод масс-спектрометрии позволит вывести ваши эксперименты на новый уровень и получить новые качественные данные в таких областях науки как биология развития, онкология, иммунология, трансляционная медицина и многих других.

Квалифицированные специалисты компании Helicon и Fluidigm помогут вам разработать оптимальную панель антител для вашего эксперимента, обучат работать на приборе и анализировать данные, а также окажут поддержку в разрешении любых возникающих вопросов.

Возврат к списку

Подпишитесь и получайте дополнительные скидки