Набор реагентов для выделения плазмидной ДНК GeneJet™ Midi

Артикул:

Производитель: Thermo Fisher Scientific

$186.12

Набор реагентов для выделения плазмидной ДНК GeneJET™ Midi обеспечивает получение большого количества плазмидной ДНК высокой степени чистоты из культур клеток E. coli. Важнейшим компонентом набора являются микроколонки с уникальной мембраной на силикагелевой основе, протекание жидкости через которую обеспечивается центрифугированием (спин-колонки) или фильтрованием под вакуумом. Набор позволяет получить до 200 мкг высококопийной плазмидной ДНК.

Состав набора:

Компонент K0481 K0482
25 экспериментов 100 экспериментов
Раствор для ресуспендирования бактериальных клеток (R1581)

60 мл

240 мл

Раствор с додецилсульфатом натрия для щелочного лизиса клеток

60 мл

240 мл

Раствор для нейтрализации клеточного лизата (R1233)

60 мл

240 мл

Реагент для связывания эндотоксинов (R1601)

15 мл

60 мл

Концентрированный раствор I для промывки плазмидной ДНК, адсорбированной на мембране (R1611)

90 мл

360 мл

Концентрированный раствор II для промывки плазмидной ДНК, адсорбированной на мембране (R1621)

90 мл

2 х 180 мл

Рибонуклеаза А

2 x 1,2 мл

8 x 1,2 мл

Буфер для элюирования плазмидной ДНК (10 мМ Трис-HCl, pH 8,5) (R1631)

18 мл

60 мл

Колонки GeneJET™ Midi, предварительно вставленные в пробирки для сбора элюата (объем 15 мл)

25 штук

100 штук

Пробирки для сбора элюата (объем 15 мл)

25 штук

100 штук

К набору прилагается подробная инструкция по его использованию.

Условия хранения и использования набора.

Реагент для связывания эндотоксинов следует хранить при +4 °С. Остальные компоненты набора для выделения плазмидной ДНК GeneJET™ Midi могут находиться при комнатной температуре (15-25 °С). Для более длительного хранения колонок рекомендуется использовать +4 °С. Если в процессе хранения в растворах выпадает осадок, то их следует прогреть при 37 °С. Перед применением растворы охладить до 25 °С. Рибонуклеаза A до вскрытия пробирки может храниться при комнатной температуре. После первого использования пробирку с ферментом следует поместить в морозильную камеру с температурой -20 °С. Раствор для ресуспендирования бактериальных клеток после добавления в него рибонуклеазы А нужно хранить при +4 °С и использовать в течение 6 месяцев.

Внимание! Раствор для щелочного лизиса клеток и концентрированный раствор I для промывки плазмидной ДНК, адсорбированной на мембране, содержат вещества, вызывающие раздражение кожи. Работать с ними необходимо в перчатках.

Пакет со спин-колонками рекомендуется тщательно закрывать после каждого использования.

Принцип «работы» набора.

Осажденные бактериальные клетки ресуспендируют и подвергают щелочному лизису в присутствии додецилсульфата натрия для высвобождения плазмидной ДНК. Полученный лизат нейтрализуют для восстановления вторичной структуры денатурированной плазмидной ДНК, находящейся в растворе. Клеточный дебрис, представляющий собой белки и хромосомную ДНК, а также додецилсульфат натрия остаются в осадке, который удаляют в центрифугированием. Раствор, содержащий плазмидную ДНК, наносят на спин-колонку GeneJET™. Высокая ионная сила раствора лизата создает необходимые условия для связывания плазмидной ДНК с силикагелевой мембраной колонки. Мембрану с адсорбированной на ней ДНК промывают для удаления примесей. Очищенную плазмиду элюируют буфером и хранят при -20 °С.

Оптимальный объем клеточной культуры, используемой на начальном этапе, и реальное количество выделяемой ДНК зависит от среды, применяемой для роста клеточной культуры, и количества копий плазмиды. Ночную культуру рекомендуется растить в среде LB (Лурия-Бертани) до оптической плотности раствора A600 = 2-3. Как правило, и для выделения высококопийных плазмид (сконструированных на основе векторов pUC, pBluescript, pGEM, pTZ, pJET) и для выделения низкокопийных плазмид (сконструированных на основе векторов pBR322, pACYC, pSC101) достаточно использовать 50 мл культуры клеток E. coli (штаммы DH10B, DH5альфа, XL1-Blue, JM109, JM107, TOP10 и др.). Максимальный объем культуры (Vмакс), который можно использовать для выделения плазмидной ДНК с помощью набора GeneJET™ Midi, рассчитывается по фомуле: Vмакс (мл) = 150/A600.

Для выделения плазмидной ДНК с помощью набора реагентов GeneJET™ Midi предлагается использовать один из трех протоколов. Протокол А предполагает применение низкоскоростного центрифугирования (до 5000 g), протокол B – высокоскоростного центрифугирования (до 48000 g), протокол С – фильтрования под вакуумом. Выделенная ДНК без дополнительной очистки может быть использована в молекулярно-биологических экспериментах, таких как гидролиз эндонуклеазами рестрикции, полимеразная цепная реакция, транскрипция in vitro, трансформация и трансфекция в клетки, анализ на автоматическом секвенаторе.

Достоинства метода:

  • Эффективность – высокий выход очищенной плазмидной ДНК (до 200 мкг из примерно 50 мл бактериальной культуры).
  • Высокая концентрация очищенной плазмидной ДНК – более 400 нг/мкл.
  • Скорость – вся процедура занимает 60 мин, что существенно быстрее по сравнению с колоночной хроматографией низкого давления.
  • Удобство – не требуется экстракция белков смесью фенол/хлороформ или осаждение ДНК спиртом; используются спин-колонки, центрифугирование или фильтрование под вакуумом.
  • Выделенная ДНК готова к последующему использованию.

Дополнительная информация о наборе реагентов для выделения плазмидной ДНК GeneJET™ Midi и протоколы выделения плазмидной ДНК доступны на сайте Thermo Fisher Scientific:


Здесь вы можете увидеть расходные материалы для данного оборудования

Здесь вы можете увидеть комплектующие для данного оборудования

Модификации

Описание

Артикул

Цена

Кол-во

Сумма

Набор реагентов для выделения плазмидной ДНК GeneJet™ Midi

K0481

$186.12

$0

Набор реагентов для выделения плазмидной ДНК GeneJet™ Midi

K0482

$659.69

$0

Итого: $0

Заказать