Набор реагентов для выделения геномной ДНК из цельной крови GeneJET™ Mini

Артикул: K078*

Производитель: Thermo Fisher Scientific

Цена в валюте / в рублях

Фасовка:

$150.37

8 728.39 р.

Принцип работы набора:

Образцы обрабатывают протеиназой К в прилагаемом растворе для лизиса клеток из цельной крови. В лизат добавляют этанол и полученный раствор, содержащий геномную ДНК, наносят на мембрану спин-колонки GeneJET™. Мембрану с адсорбированной на ней ДНК промывают буферами для удаления примесей. Геномную ДНК элюируют буфером с низкой ионной силой и хранят при -20°С.

Внимание! Для того, чтобы минимизировать деградацию ДНК, следует избегать повторных циклов замораживания-размораживания образцов и работать со свежими пробами или пробами, которые были заморожены немедленно после отбора и хранились при -20 или -70°С.

Как правило, значение А260/A280 для очищенной ДНК составляет 1,7-1,9. Однако если концентрация ДНК ниже 20 нг/мкл, могут наблюдаться отклонения от этого значения.

Выделенная ДНК, свободная от ингибиторов ферментов, РНК и белков, без дополнительной очистки может быть использована в молекулярно-биологических экспериментах, таких как гидролиз эндонуклеазами рестрикции, полимеразная цепная реакция, блот-гибридизация в варианте Саузерн.

Достоинства метода:

  • Эффективность – высокий выход очищенной геномной ДНК большого размера;
  • Скорость – процедура занимает менее 20 мин после лизиса клеток;
  • Удобство – не требуется экстракция белков токсичной смесью фенол/хлороформ, длительная процедура осаждения ДНК спиртом, хроматография на доростоящих сорбентах; используются спин-колонки;
  • Возможность применения для широкого спектра образцов, таких как свежая или замороженная кровь млекопитающих (обработанная антикоагулянтами – ЭДТА, цитратом натрия или гепарином), кровь после длительного хранения, светлый слой кровяного сгустка, костный мозг и биологические жидкости;
  • Выделенная ДНК готова к последующему использованию.

Методика проведения эксперимента
(Основной протокол – выделение геномной ДНК из цельной крови)

Внимание! В методике скорость центрифугирования в оборотах в минуту (об./мин) приводится для микроцентрифуги на 24 пробирки.

Объем образца крови должен составлять 200 мкл.

Если объем образца меньше указанного, к образцу необходимо добавить нужное количество однократного буфера PBS (137 мМ NaCl, 2,7 мМ КСl, 10 мМ Na2HPO4, 2 мМ KH2PO2, pH 7,4) или буфера TE (10 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 1 мМ ЭДТА). Буферы PBS и TE не входят в состав набора.

Если объем образца превышает 200 мкл, следует разрушить красные кровяные клетки перед процедурой лизиса согласно следующему протоколу.

  • К 500 мкл цельной крови добавить 1 мл ледяной воды, свободной от нуклеаз, тщательно перемешать пипетированием или на шейкере-встряхивателе типа «Vortex»;
  • Инкубировать образец 5 мин при комнатной температуре;
  • Центрифугировать 5 мин при 800 х g (~3000 об./мин);
  • Удалить жидкость над осадком;
  • Растворить осадок в 200 мкл однократного буфера PBS;

Перед первым использованием добавить указанные ниже (табл. 2) количества этанола (96-100%) к концентрированному буферу WBI для промывки адсорбированной на мембране геномной ДНК из цельной крови и к концентрированному буферу II для промывки геномной ДНК, адсорбированной на мембране.

K0781
(50 экспериментов)
K0782
(250 экспериментов)
Буфер WBI Буфер II Буфер WBI Буфер II
Концентрированный буфер 10 мл 10 мл 40 мл 40 мл
Этанол (96-100%) 30 мл 30 мл 120 мл 120 мл
Общий объем: 40 мл 40 мл 160 мл 160 мл
  • К 200 мкл цельной крови добавить 20 мкл раствора протеиназы К, перемешать на шейкере-встряхивателе типа «Vortex». Добавить 400 мкл раствора для лизиса клеток из цельной крови, тщательно перемешать до получения однородной суспензии;
  • Инкубировать образец при 56°С в течение 10 мин, иногда встряхивая или используя качающуюся водяную баню, платформу или термомиксер, до полного лизиса клеток;
  • Добавить 200 мкл этанола (96-100%) и перемешать пипетированием;
  • Нанести полученный раствор на мембрану спин-колонки GeneJET™. Центрифугировать 1 мин при 6000 х g (~8000 об./мин). Удалить пробирку, содержащую прошедший через мембрану раствор. Поместить спин-колонку в чистую пробирку для сбора элюата объемом 2 мл (входит в набор);
  • Нанести на мембрану спин-колонки 500 мкл буфера WBI для промывки адсорбированной на мембране геномной ДНК из цельной крови (буфер предварительно разбавлен этанолом согласно табл. 2). Центрифугировать 1 мин при 8000 х g (~10000 об./мин). Удалить прошедший через мембрану раствор из пробирки и поместить спин-колонку в ту же пробирку;
  • Нанести на мембрану спин-колонки 500 мкл буфера II для промывки геномной ДНК, адсорбированной на мембране (буфер предварительно разбавлен этанолом согласно табл. 2). Центрифугировать 3 мин при ≥20000 х g (≥14000 об./мин). Удалить из пробирки раствор, прошедший через мембрану. Поместить спин-колонку в ту же пробирку. Центрифугировать 1 мин при ≥20000 х g (≥14000 об./мин). Удалить пробирку, содержащую прошедший через мембрану раствор. Поместить спин-колонку в стерильную пробирку для сбора элюата объемом 1,5 мл (не входит в набор);
  • Нанести 200 мкл буфера для элюирования геномной ДНК в центр мембраны. Нельзя касаться мембраны наконечником пипетки. Выдержать 2 мин при комнатной температуре и центрифугировать 1 мин при 8000 х g (~10000 об./мин). Повторное проведение стадии 7 с использованием 200 мкл буфера для элюирования позволяет увеличить выход ДНК. Если требуется получить более концентрированный раствор ДНК или если ДНК выделяли из маленького объема исходного материала (например, 50 мкл), объем буфера для элюирования может быть уменьшен до 50-100 мкл. Однако это приведет к уменьшению выхода целевой ДНК;
  • Удалить спин-колонку. Использовать выделенную ДНК немедленно или хранить при -20°С;

Здесь вы можете увидеть расходные материалы для данного оборудования

Здесь вы можете увидеть комплектующие для данного оборудования

Модификации

Описание

Артикул

Цена

Кол-во

Сумма

Набор реагентов для выделения геномной ДНК из цельной крови GeneJET™ Mini

K0782

$681.04 39 531.72 р. 39 531.72 р. 681.04 39531.715944 39531.715944 RUB

$0

0 р.
Набор реагентов для выделения геномной ДНК из цельной крови GeneJET™ Mini

K0781

$150.37 8 728.39 р. 8 728.39 р. 150.37 8728.392057 8728.392057 RUB

$0

0 р.

Итого: $0

0 р. Заказать