Набор реагентов для клонирования продуктов ПЦР CloneJET™

Артикул: K1231

Производитель: Thermo Fisher Scientific

Цена в валюте / в рублях

Фасовка:

$167.83

10 677.09 р.

Набор реагентов для клонирования продуктов ПЦР CloneJET™ представляет собой усовершенствованную систему положительной селекции чужеродных ДНК в ходе их высокоэффективного клонирования. Набор предназначен для клонирования ДНК-фрагментов, полученных в полимеразной цепной реакции (ПЦР) с участием Pfu ДНК-полимеразы, Taq ДНК-полимеры, Taq ДНК-полимеразы Dream™ (ЕР0701) или других термостабильных ДНК-полимераз. С помощью этого набора можно также успешно клонировать и другие фрагменты ДНК, как с «тупыми», так и с «липкими» концами.

В состав набора входит специальный линейный вектор для клонирования pJET1.2/blunt, обеспечивающий положительную селекцию клонов. Он содержит область множественного клонирования, промотор T7 ДНК-полимеразы для транскрипции in vitro, а также «летальный» ген, структура которого нарушается при лигировании в вектор клонируемого фрагмента ДНК. Размер встраиваемой ДНК может составлять от 6 до 10000 пар нуклеотидов. Фосфорилирование фрагментов ПЦР не требуется. Лигирование в вектор pJET1.2/blunt фрагментов ДНК с «тупыми» концами, генерируемыми ДНК-полимеразами с корректирующей активностью, в вектор pJET1.2/blunt занимает 5 мин.

Выступающие остатоки dA, образующиеся на 3ꞌ-концах продукта ПЦР при использовании Taq ДНК-полимеразы или других термостабильных ДНК-полимераз, лишенных корректирующей активности, перед лигированием в вектор удаляются специальным термостабильным ферментом, входящим в состав набора. Время этой реакции составляет 5 мин. Все распространенные лабораторные штаммы E. coli пригодны для трансформации рекомбинантной ДНК.
Исходный циклизованный вектор pJET1.2/blunt после трансформации экспрессирует эндонуклеазу рестрикции, которая подвергает его гидролизу. Клетки E. coli, не содержащие рекомбинантный вектор, погибают при посеве. Вставка ПЦР продукта инактивирует «летальный» ген, что приводит к ингибированию синтеза эндонуклеазы рестрикции. В результате на культуральном планшете появляются только рекомбинантные клоны, содержащие вставку целевой ДНК. Таким образом, процедура клонирования существенно ускоряется из-за отсутствия необходимости проведения «сине-белого» теста.
Праймеры, входящие в состав набора, позволяют провести секвенирование и подтвердить нуклеотидную последовательность клонированного фрагмента ДНК.

Состав набора.

Компонент K1231
20 экспериментов
K1232
40 экспериментов
Вектор для клонирования pJET1.2/blunt (50 нг/мкл) 24 мкл 46 мкл
Двукратный буфер для реакции 300 мкл 600 мкл
Т4 ДНК-лигаза (5 ед.акт./мкл) 24 мкл 46 мкл
Фермент для удаления «липких» концов ДНК 24 мкл 46 мкл
Прямой праймер pJET1.2 для секвенирования (10 мкМ водный раствор) 50 мкл 100 мкл
Обратный праймер pJET1.2 для секвенирования (10 мкМ водный раствор) 50 мкл 100 мкл
Контрольный ПЦР-фрагмент длиной 976 пар нуклеотидов с дополнительными остатками dA на 3'-концах (24 нг/мкл) 8 мкл 12 мкл
Вода без примеси нуклеаз 1,25 мл 1,25 мл

Все компоненты набора протестированы в экспериментах по трансформации штаммов XL1-Blue. Эффективность трансформации – более 106 колонеобразующих единиц (КОЕ) на 1 мкг ДНК. Эффективность клонирования контрольного продукта ПЦР превышает 2х104 КОЕ на 1 мкг ДНК. Более 90% рекомбинантных плазмид содержат целевую вставку.

Условия хранения: -20 °C.

Дополнительная информация

Модификации

Описание

Артикул

Цена

Кол-во

Сумма

Набор реагентов для клонирования продуктов ПЦР CloneJET™

K1231

$167.83 10 677.09 р. 10 677.09 р. 167.83 10677.092855 10677.092855 RUB

$0

0 р.
Набор реагентов для клонирования продуктов ПЦР CloneJET™

K1232

$318.20 20 243.41 р. 20 243.41 р. 318.2 20243.4067 20243.4067 RUB

$0

0 р.

Итого: $0

0 р. Заказать

Здесь вы можете увидеть расходные материалы для данного оборудования

Здесь вы можете увидеть комплектующие для данного оборудования